Definición
La prueba de Northern blot es un método de análisis de laboratorio que se utiliza para estudiar el ARN. Específicamente, los fragmentos de ARN purificados provenientes de una muestra biológica (como sangre o tejido) se separan mediante corriente eléctrica para hacerlos desplazar a través de un gel o matriz similar a un tamiz, que permite que los fragmentos más pequeños se desplacen más rápido que los fragmentos más grandes. Los fragmentos de ARN se transfieren fuera del gel o de la matriz a una membrana sólida, que luego se expone a una sonda de ADN marcada con una sustancia radioactiva, fluorescente o química. La marcación permite que los fragmentos de ARN que contienen secuencias complementarias a la secuencia de ADN utilizada como sonda sean visualizados en el Northern blot.
Narración
Northern blot se utiliza para analizar moléculas de ARN. Normalmente se aísla el conjunto de moléculas de ARN de una muestra de células o de tejido, y después se facilita la migración del ARN en un gel por electroforesis. De esta manera se colocan los fragmentos más pequeños en la parte inferior y los fragmentos más grandes en la parte superior. Una vez que hemos terminado con lo que llamamos correr el gel, se aplica una membrana sobre el gel y se transfieren, bien por un gradiente salino o por transferencia electroforética, las moléculas de ARN, del gel a la membrana, la cual normalmente es de nitrocelulosa. Este producto transferido a nitrocelulosa se va a ver como un pedazo de papel blanco. Pero va a hacer que seamos capaces de estudiar a continuación las diferencias en las muestras de ARN. Podemos preguntar si una molécula de ARN está o no presente, marcando dicho ARN y buscando el que es similar en la membrana, o podemos preguntar ¿cambia de tamaño? Se podría esperar un cambio de tamaño si tiene lugar una alteración en el procesamiento del ARN. El término Northern blot es realmente un juego de palabras de cómo las personas inicialmente analizaban el ADN. Un hombre llamado Edward Southern desarrolló el protocolo para hacer un análisis similar, pero permitiendo que fueran las moléculas de ADN las que migraban en un gel y después se transferían a una membrana. Y ese protocolo recibió su nombre, Southern que significa del sur. Así que pareció un juego de palabras divertido que cuando se analiza una molécula de ARN de una manera similar, la técnica reciba el nombre de Northern o del norte. El término "blot" o mancha, se refiere al protocolo en si donde se tiene un gel y luego se coloca como si fuera un sándwich, con la membrana que desea transferir en la parte superior, y finalmente se agrega una pila de material absorbente, -usamos toallas de papel - y es como si estás emborronando, transfiriendo, el ADN a la parte superior de la membrana para su posterior análisis.
